Bacteriorhodopsin (bR) als elektronisches Leitungsmedium: Stromtransport durch bR-haltige Monoschichten

Ergebnisse und Diskussion

Eine Suspension von PM-Fragmenten, die Wildtyp-bR enthielten, wurde hergestellt (12) und mit exogenem Eiphosphatidylcholin (PC) in Vesikel durch eine Modifikation der Methode von Racker (13) rekonstituiert. Um die proteinmengenabhängigen Strom-Spannungs- (I–V)–Eigenschaften weiter zu überprüfen, wurde eine weitere vesikuläre bR-Suspension unter Verwendung von Octylthioglucosid (OTG) als Detergens hergestellt (14). Monolagen der nativen bR-haltigen Membranen wurden dann hergestellt, indem die Vesikel auf einem Al-Substrat (ein ≈50 nm dicker Film aus auf Quarz verdampftem Al) mit einer Schicht aus natürlichem Aluminiumoxid auf seiner Oberfläche (hier als AlOx dargestellt) adsorbiert wurden. Die angehängten Vesikel öffnen sich dann und verschmelzen und bilden feststoffgestützte Lipiddoppelschichten. Um die elektrostatische Adsorption der Vesikel zu fördern, silanisierten wir zuerst die Substratoberfläche mit (3-aminopropyl) trimethoxysilan (APTMS) (15), gefolgt von einer Behandlung mit 0,1 M HCl, um eine positiv geladene Oberfläche zu erhalten. Sowohl bR / PC- als auch bR / OTG-Vesikelsuspensionen zeigten lichtinduzierte Protonenpumpen nach innen, wie zuvor festgestellt wurde (13, 16). Basierend auf dieser Beobachtung postulieren wir eine bevorzugte Orientierung von bR mit der cytoplasmatischen Seite, die der Substratoberfläche nach der Vesikelfusion zugewandt ist, um bR-Monolayer-Membranen zu bilden, die mit der orientierungsabhängigen Transmembran-Proton-Translokation übereinstimmen (17).

Abb. 2A zeigt ein repräsentatives AFM-Bild eines Substrats, bedeckt mit bR-haltigen fusionierten Vesikelmembranen, hergestellt durch 10-min-Adsorption auf dem Substrat. Da es schwierig ist, eine ideale Monoschicht (100% Abdeckung) zu erhalten, gibt es immer einige probenfreie Risse oder Nadelstiche (typischerweise mehrere zehn Nanometer) zwischen verschmolzenen Vesikelmembranen. Diese Sprünge und Splintlöcher sind klein genug, damit die Au-Auflage (0.5-mm Durchmesser) sie überbrückt (für Transportmaß) aber groß genug, damit unsere Flughandbuchmaße Stärkemessungen ermöglichen. Die Schnittanalyse zeigt, dass das höchste durchschnittliche Höhenmerkmal ≈ 5,2 nm beträgt, was gut mit der Dicke eines einzelnen PM-Patches übereinstimmt, was auf die Bildung einer bR-Monoschicht hinweist. Die wenigen weißen Punkte in Fig. 2A sind übrig gebliebene abgeflachte Vesikel auf der Oberseite der Folie. Dichtere, monoschichthaltige Membranen (Fig. 2B) resultieren nach ≈20min Adsorption der Vesikel auf dem Substrat. Abb. 2B ermöglicht auch eine zufällige Messung der Membran-/Monolayer-Dicke (5,1 nm zwischen Markern) wegen eines Risses in der Membran infolge übermäßiger Trocknung. Längere Adsorptionszeiten (>30 min) führten zur Mehrschichtbildung. Nach den gleichen Verfahren wurden Monoschichten von Membranen mit modifiziertem bR hergestellt. Alle Proben für elektrische Transportmessungen wurden durch 20 min Adsorption vorbereitet und durch AFM überprüft, um die Monoschichtqualität sicherzustellen. Es ist erwähnenswert, dass im Gegensatz zu oberflächengestützten reinen Lipiddoppelschichten, die instabil sind und beim Trocknen (geschweige denn beim Trocknen unter N2-Fluss) aufgrund des Verlusts hydrophober Wechselwirkungen zwischen Lipiden im trockenen Zustand zerfallen, die als vorbereiteten PC / bR-Membranen sind ziemlich stabil (auch nach milder N2-Trocknung), wie aus AFM-Bildern hervorgeht. Wir schreiben dieses Phänomen den hohen negativen Ladungen auf bR-Oberflächen zu, die stark mit der positiv geladenen Substratoberfläche wechselwirken können und als Gerüst zur Versteifung der Lipiddoppelschichten dienen. Diese Wechselwirkung macht die Doppelschichten ausreichend robust, um wiederholte und reproduzierbare Elektronentransportstudien in Monolayer-Manier unter Umgebungsbedingungen und bei Raumtemperatur zu ermöglichen.

Abb. 2. Flughandbuch-Bilder von bR-haltigen fixierten Membranen. (A links) Repräsentative Flughandbuchbilder (2 × 2 µm) von den Einzelschichten von fixierten Membranen von bR-enthaltenden Bläschen, hergestellt durch 10-minütige Aufnahme auf Al/AlOx Substrat, derivatisiert mit APTMS. (A rechts und B rechts) Zeilenscans, die eine durchschnittliche Höhe der stärksten Merkmale von ≈ 5,2 nm zeigen. Der Höhenbalken deckt 20 nm ab. (B Links) Ein dichter gepacktes bR mit einer Monoschicht, hergestellt durch 20-minütige Adsorption von Vesikeln auf dem Substrat (1,25- × 1,25-µm-Bild). Der Riss in der Membran, induziert durch übermäßiges Trocknen (etwas, das bei der Vorbereitung der für elektrische Transportmessungen verwendeten Proben sorgfältig vermieden wurde), zeigt, dass die Monoschicht 5,1 nm dick ist (zwischen Markern).

I–V-Messungen wurden an planaren Übergangsstrukturen in einem Reinraum der Klasse 10000 bei 293 K und 40% relativer Luftfeuchtigkeit durchgeführt, wobei die Probe zwischen dem Al / AlOx-Substrat und den Au-Kontakten angeordnet war. Auf jeder Probe wurden mehrere kleine Au-Pads mit einem Durchmesser von 0,5 mm durch die LOFO-Technik auf der Monoschicht abgeschieden. Die Schaltung wird vervollständigt, indem eine Wolframelektrode vorsichtig auf die Goldelektrode (11) gelegt wird. Der Hauptvorteil der Verwendung der LOFO-Technik zur Herstellung des oberen Kontakts im Vergleich zu Metallverdampfungsabscheidungen oder Quecksilberkontakten besteht darin, dass die vorgeformten Metallflecken auf einigen kleinen Nadelstichen und Rissen (typischerweise in zehn Nanometern) schwimmen und diese überspannen können, was elektrische Messungen erfolgreich macht. Abb. 3A zeigt typische I-V-Charakteristiken eines resultierenden Metall/(bR-Monolayer-in-Lipid-Bilayer)/Metall-Übergangs über einen ±1-V-Bias-Bereich. Die I–V-Kurven wurden nach Dunkeläquilibrierung und anschließender Bestrahlung mit grünem (λ > 550 nm, 20 mW/cm2) Licht aufgenommen. Im Dunkeln wurden 0,75 nA-Ströme bei einer angelegten Vorspannung von 1 V detektiert. Nach der stationären Beleuchtung mit grünem Licht steigt der Strom bei einer angelegten Vorspannung von 1 V von 0,75 auf 1,7 nA an. Sobald das grüne Licht blockiert war, fiel der Strom über 2-3 min auf seinen ursprünglichen Dunkelwert ab. Möglicherweise ist der Lichteffekt mit der Bildung des photochemisch induzierten M-Intermediats verbunden, das unter trockenen Monoschichtbedingungen einen langsameren thermischen Zerfall aufweisen kann als bei Membranen in Lösung (18). Das System kann zwischen diesen beiden Zuständen durch abwechselnde grüne Hell- und Dunkelanpassung umgeschaltet werden, was darauf hinweist, dass das bR-Präparat seine Photoaktivität beibehält. Steuergeräte mit nur einer APTMS-Monoschicht zwischen Al / AlOx- und Au-Kontakten wurden immer mit typischen Übergangswiderständen <50 Ω kurzgeschlossen, was darauf hinweist, dass die AlO x-Schichten dünn genug für zuverlässige elektrische Messungen sind.

Abb. 3.

I–V-Eigenschaften von Metall– (bR-Monoschicht)-Metallverbindungen. (A) I–V-Kurven eines Au / (Wildtyp–bR) / (APTMS–AlOx-Al) -Übergangs mit orientierter bR-Monoschicht, hergestellt durch Vesikelfusion und gemessen bei Umgebungsbedingungen im Dunkeln bei Beleuchtung bei λ > 550 nm und Dunkeladaption. Die Pfeile zeigen, dass die I–V-Antworten zwischen den beiden Zuständen getaktet werden können. Die Au-Pad-Fläche betrug 2,10-3 cm2. (B) Darstellung von Dunkelströmen bei einer Vorspannung von +1,0 V für acht unabhängige Übergänge, die aus bR / PC-Vesikeln bzw. aus bR / OTG-Vesikeln hergestellt wurden.

Die entscheidende Rolle, die bR bei der Erzeugung der gemessenen Transmembranströme spielt, wird durch die Verwendung einer anderen Monoschichtmembran mit höherem bR-Gehalt veranschaulicht, die wie in Ref. 14 durch Verwendung von OTG als Detergens zur Verhinderung der Vesikelbildung. Diese beiden Arten von BR-Monoschichten (die Membranen mit unterschiedlichen bR-Gehalten enthalten, die aus bR / PC- oder bR / OTG-Vesikeln hergestellt wurden) werden als Membran A oder B und Übergang A oder B für entsprechende Verbindungen bezeichnet. Die typischen Extinktionen (in OD) bei ≈560 nm betragen ≈0,15 × 10-3 und ≈1,0 × 10-3 für Membran A bzw. Der bR-Gehalt von Membran B (≈6-fach höher als der von Membran A) ist ähnlich dem von bR in einer trockenen PM-Monoschicht, basierend sowohl auf der experimentellen Absorption (18) als auch auf dem Wert, berechnet für eine ideale PM-Monoschicht (≈1 × 10-3 OD bei ≈560 nm). Gemittelte Dunkelströme bei einer gegebenen angelegten Vorspannung der Übergänge B sind fast achtmal so groß wie die Übergänge A, d. H. sehr eng proportional zum bR-Gehalt in den Membranen (Fig. 3B). Dieser Befund legt nahe, dass Elektronen hauptsächlich über bR durch die Membran und nicht durch die Lipiddoppelschichten gelangen. Beide Verbindungen A und B sind photoaktiv und zeigen, wenn sie auf den bR–Gehalt normalisiert sind, ähnliche I-V-Eigenschaften.

Die durchschnittlichen Lichteffekte auf den Stromfluss der Übergänge A und B betragen typischerweise ≈1 bzw. ≈3 nA bei einer angelegten Vorspannung von 1 V. Die lichtinduzierte Änderung des Übergangs-B-Stroms ist etwas geringer als erwartet, basierend auf den bR-Gehalten der beiden Arten von Proben. Der Unterschied kann auf Unterschiede in den Anteilen des M-Intermediats zurückzuführen sein, die sich in den Proben A und B anreichern können, und / oder auf Unterschiede zwischen den beiden Proben in der durch die M-Bildung bedingten photoinduzierten Proteinkonformationsänderung.

Der messbare Stromfluss durch das 5 nm dicke Protein ist bemerkenswert, verglichen mit anderen ähnlichen Systemen mit derselben Lücke. Zum Beispiel stellen wir fest, dass ein typisches 1 nm langes Peptid ≈12 na bei 0,5 V (19) passiert, ähnlich wie ein einzelnes 1,2 nm langes Oktandithiol (20). Wenn alle anderen Faktoren gleich sind und eine exponentielle Abnahme des (Tunnel-) Stroms mit zunehmender Moleküllänge angenommen wird, ergibt sich ein Strom von ≈10-23 A für eine Fläche von ≈35 nm2 (entspricht der Fläche eines bR-Trimers plus Lipide) unter Verwendung des Simmons-Modells für das direkte Tunneln (vergleiche Abschnitt 2 und Abbildung 2 in Ref. 21). Basierend auf unseren optischen Absorptionsdaten schätzen wir die Dichte von bR in unseren Membranen auf ≈109 bR-Trimer pro 0,002-cm2-Übergang. Dieser Wert ergibt einen experimentell gemessenen Strom von 3 × 10-19 A pro BR-Trimer, d.h., mindestens vier Größenordnungen mehr als das, was für das direkte Tunneln durch 5-nm-Peptide, Alkyle oder ein dielektrisches Medium mit ähnlicher Dielektrizitätskonstante geschätzt wird. Es ist daher wahrscheinlich, dass der aktuelle Transportprozess komplexer ist als der einfache Tunnelbau durch eine einzige Barriere. In der Tat müssen natürliche Proteine, deren Funktion den Elektronentransfer umfasst, Elektronen häufig mit hoher Richtungsspezifität über große Entfernungen übertragen. Ein solcher Transfer über längere Strecken beinhaltet immer eine Kette von Cofaktoren, wie Redoxzentren (22). In Analogie zu diesen Redoxzentren können wir Retinal, das π-Elektronensystem, das sich im Zentrum von bR befindet, als Zwischenprodukt auf dem Weg der Elektronen durch das Protein betrachten. Wenn der Prozess anstelle eines Tunnels durch ein langes Molekül in (mindestens) zwei Schritten mit einer delokalisierten Elektronenwegstation von 2,3 nm von jeder Seite abläuft, ergeben Schätzungen ähnlich denen, die oben verwendet wurden, Ströme von ≈ 10-20 A pro 35 nm 2 (21) .

Um diese letzte Idee experimentell zu überprüfen, haben wir Verbindungen von netzhautfreien bR-Membranen vorbereitet und untersucht. Um diese Membranen herzustellen, beleuchteten wir zuerst das Protein, das mit Hydroxylamin gemischt wurde. Diese Reaktion führt zum Aufbrechen der protonierten Schiff-Basenbindung, wodurch das Apo-Protein Bacterioopsin (BO) und Retinaloxim erhalten bleiben, das an der Membran haften bleibt (12). Das Retinaloxim wurde dann durch Resuspendieren der Apo-Membranen in einer Lösung von BSA entfernt, gefolgt von Inkubation und Zentrifugation. BSA solubilisiert kompetitiv das Retinaloxim, das in die Membran eingebettet ist. Wiederholte Zentrifugenwäschen entfernen BSA, sobald das Protein von allen Chromophorkontaminanten gereinigt wurde (5). Der Stromfluss durch die (netzhautfreie) Apo-Membran ist etwa drei Größenordnungen geringer als bei nativen bR-Membranen (vgl. 4A und 3A). Die Strömung war sehr laut und instabil. Dieses Ergebnis unterstützt die Idee, dass Strom dominant durch die bR-Proteine fließt und dass die Netzhaut als Stromtransportmediator dient. Weiterhin kann der mit den nativen bR-haltigen Membranen beobachtete Photoeffekt auf die Netzhaut zurückgeführt werden.

Abb. 4.

I–V Eigenschaften von Metall-Apo-Membran-Metall-Verbindungen. (A) Typische I–V-Charakteristik einer durch Vesikelfusion hergestellten und unter Umgebungsbedingungen gemessenen Au / Apo-Membran (netzhautfrei) / (APTMS–AlOx–Al) -Verbindung. (B) I–V-Kurven der Au / apo-Membran (apo–Protein bR plus Retinaloxim) /(APTMS–AlOx-Al) -Verbindung, hergestellt durch Vesikelfusion und gemessen bei Umgebungsbedingungen im Dunkeln und bei Beleuchtung bei λ > 550 nm. Es wurde kein Photoeffekt auf den Sperrschichtstrom beobachtet.

Um zu überprüfen, ob die kovalente Bindung zwischen Netzhaut und Protein eine Voraussetzung für den Elektronentransport ist, haben wir Apo–Membranproben mit Retinaloxim gemessen. Zumindest ein Teil des Retinaloxims wird noch die retinale Bindungsstelle besetzen, wie aus der CD-Spektroskopie abgeleitet (23). I-V-Kurven solcher Proben zeigten ein Verhalten ähnlich dem von nativem bR in Bezug auf die Stromgröße, aber sie zeigten keine Reaktion auf grünes Licht, wie in Proben ohne Absorption in diesem Bereich erwartet (Abb. 4 B). Die I-V-Eigenschaften sind näher an linear als das, was wir für Wildtyp-Proben finden, was auf eine Änderung der Tunnellücke zwischen Retinal und Retinaloxim hindeuten kann.

Um den Effekt der retinalen Isomerisierung und des Photozyklus auf den Lichteffekt weiter zu beleuchten, untersuchten wir künstliche Pigmente, die von 13-cis (3) -blockierten Retinalen abgeleitet sind (Schema 1), wobei die kritische C 13 Eingebettetes Bild1C 14 Isomerisierung wird durch eine 5-gliedrige Ringstruktur blockiert (24, 25). Für diese künstlichen Pigmente werden I–V-Eigenschaften ähnlich denen gefunden, die mit Apo-Membranen mit Netzhautoxim erhalten werden. Der Mangel an Photoeffekt in Übergängen, die mit Apo-Membranen hergestellt wurden, steht im Einklang mit dem Fehlen eines Photozyklus in diesen Proben (24, 26), was die Hypothese stützt, dass das Auftreten einer Netzhautisomerisierung eine Voraussetzung für den Lichteffekt ist. Wir gehen davon aus, dass in den ≤10 6 V / cm-Feldern über das Protein, die in unseren Experimenten erreicht werden, keine ausgeprägte, durch elektrische Felder induzierte BR-Konformationsänderung auftritt (d. h. bR bleibt nativ). Wir stellen fest, dass die Au-Oberelektrode für grünes Licht halbtransparent ist. Beispielsweise überträgt ein 55-nm-Au-Film ≈70% bei ≈550 nm (27). Ein möglicher physikalischer Ursprung des Photoeffekts aus der Nanogap-planaren Metallnanostruktur selbst, beispielsweise durch Oberflächenplasmonenanregung, kann sicher ausgeschlossen werden (28). Auf der Grundlage dieser und der oben beschriebenen Ergebnisse führen wir den Photoeffekt auf die Sperrschichtströme auf die 13-cis/ all-trans retinale Photoisomerisierung (4) und die daraus resultierenden Proteinkonformationsänderungen zurück. Wir stellen fest, dass in unseren Experimenten die Elektronen von Metallelektroden stammen und bR unter angelegter Spannung von Elektrode zu Elektrode passieren, wobei bR als elektronisches Leitungsmedium wirkt. In dieser Hinsicht unterscheidet sich bR von Systemen wie den photosynthetischen Reaktionszentren, in denen der Elektronentransfer zwischen Cofaktoren photoinduziert wird.

Dies geht aus den Berechnungen und beispielsweise aus dem negativen Ergebnis von Abb. 4A, dass der Mechanismus nicht (nur) einer des direkten Tunnelns ist. Es ist auch unwahrscheinlich, dass es sich angesichts der (Einzelmolekül-) Ergebnisse der Arbeit von Selzer et al. (29). Wie können dann die Elektronen das Protein durchqueren? Unsere experimentellen Ergebnisse zeigen deutlich, dass der retinale Chromophor eine notwendige Komponente für den Leitungsprozess ist. Es ist bekannt, dass die Netzhaut über ein H-gebundenes Netzwerk mit der extrazellulären Seite verbunden ist, was wahrscheinlich einen elektrostatisch abgeschirmten Pfad für den Ladungstransport bereitstellt. Da auch im Dunkeln eine gute Kopplung zwischen retinaler und extrazellulärer Seite besteht, muss dieser Weg unabhängig von der Beleuchtung vorhanden sein. Seine Anwesenheit kann die höher als erwarteten Ströme erklären, die wir messen. Es ist bekannt, dass die Verbindung der Netzhaut mit der zytoplasmatischen Oberfläche lichtaktiviert ist, was den von uns beobachteten Lichteffekt erklären kann. Beide Vorschläge müssen weiter untersucht werden.

Die Bedeutung des Ladungstransfers zwischen dem retinalen Chromophor und der Proteinumgebung für bR in seinem Grundzustand wurde theoretisch von Sakai et al. (30). Diese Autoren stellten die Hypothese auf, dass der Chromophor in bR durch eine Wechselwirkung seiner höchsten besetzten und niedrigsten unbesetzten Molekülorbitale mit der Proteinumgebung stabilisiert wird. Wenn genügend Ladung zwischen zwei Stellen übertragen wird, kann der (π–konjugierte) Chromophor aufgrund der starken Wechselwirkung zwischen dem höchsten besetzten und dem niedrigsten unbesetzten Molekülorbital als eine Ein-Elektronen-reduzierte / oxidierte Spezies angesehen werden (wenn er sich als Elektronenakzeptor / Donor verhält). Die wahrscheinlichste Chromophor-Protein-Interaktion wurde über das H-gebundene Netzwerk entlang des vermuteten Protonenwegs berechnet.

Es ist auch verlockend zu vermuten, dass der protonengekoppelte Elektronentransport (22, 31) eine Rolle spielt, da im Protonenkanal von bR (32, 33) quasi eindimensionale protonierte Wasserketten in festen Lipiddoppelschichten eingebettet sind, die für die beiden Elektroden in unserem Aufbau normal sind (17). Dieser Vorschlag könnte einen Teil des Unterschieds zwischen dem Elektronentransport durch bR und durch angeblich wasserfreie Peptide erklären. Angesichts einer solchen Situation stellen sich mehrere Fragen.

  1. Wie viel, wenn überhaupt, kann der Elektronentransport durch bR von einem eingebauten Protonenkanal profitieren?

  2. Wie beeinflussen der Chromophor und die dazwischenliegende Proteinstruktur die Geschwindigkeit des Elektronentransports mit großer Reichweite?

  3. Inwieweit können gebundene Wassermoleküle in bR zum elektronischen Strom beitragen?

Möglicherweise können temperaturabhängige I-V–Messungen, obwohl diese mit diesem System alles andere als trivial sind, Aufschluss über diese Probleme geben.

Wir stellen fest, dass im Gegensatz zu einer BR-Monoschicht in Lösung der faradaische Photostrom einer trockenen bR-Monoschicht, die von der transmembranen Protonentranlokation herrührt, im Vergleich zu den beobachteten Übergangsströmen vernachlässigbar ist, da die Protonenquelle begrenzt ist. Unser Befund, dass alle beobachteten Sperrschichtströme (im Dunkeln oder unter grünem Licht) innerhalb des experimentellen Fehlers Null sind, unterstützt das Fehlen einer Steady-State-Protonentranlokation. Es gibt daher keine messbare Photoreaktion zwischen etwa ±30 mV bei ≈0 V (vgl. ref. 34; jede ≤15- bis 20-mV-Photospannung ist im Rauschen unserer Messung enthalten), was darauf hinweist, dass die lichtgetriebene Protonentranlokation über die zwischen den Elektroden gehaltene bR-Monoschicht vernachlässigbar zu den stationären Lichtströmen beiträgt. Diese Schlussfolgerung wurde durch die protonentranlokationsinduzierten bR-Photoströme in ähnlichen festkörpergestützten Lipiddoppelschichten (typischerweise 4-8 nA / cm2) (18) bestätigt, die zwei bis drei Größenordnungen niedriger sind als die hier gemessenen Übergangsströme (≈0,5-5 µA / cm2). Auch ohne direkte Verbindung zwischen Protonen- und Elektronentransport stellen wir fest, dass ein Protein, das aus elektrostatischer Sicht (Screening) für den Protonentransfer geeignet ist, möglicherweise denselben Screening-Mechanismus verwenden kann, um den Elektronentransport zu erleichtern.

Wir können unsere Ergebnisse auch mit den zuvor gemeldeten Photoströmen durch die ≈500 nm (8) und ≈100 µm (9) trockenen Multischichten vergleichen, indem wir Werte pro PM-Monoschicht (5 nm) berechnen. Eine solche Normierung ergibt Werte von ≈0,01 nA pro einzelner PM-Schicht pro cm 2, d.h., etwa vier bis fünf Größenordnungen kleiner als die Sperrschichtströme, die wir hier messen (≈0,5–5 µA/cm2). Dieser dramatische Unterschied verdeutlicht die Schwierigkeit bei der Interpretation der früheren, bahnbrechenden Messungen (9) und unterstreicht die Bedeutung der Verwendung einer möglichst gut definierten Konfiguration für Elektronentransportmessungen biologischer Systeme. Mit solchen Konfigurationen wird es dann auch möglich, Messungen in Abhängigkeit von gesteuerten Variationen des Systems durchzuführen.

Ergebnisse und Diskussion Eine Suspension von PM-Fragmenten, die Wildtyp-bR enthielten, wurde hergestellt (12) und mit exogenem Eiphosphatidylcholin (PC) in Vesikel durch eine Modifikation der Methode von Racker (13) rekonstituiert. Um die proteinmengenabhängigen Strom-Spannungs- (I–V)–Eigenschaften weiter zu überprüfen, wurde eine weitere vesikuläre bR-Suspension unter Verwendung von Octylthioglucosid (OTG) als Detergens hergestellt (14). Monolagen der nativen bR-haltigen…

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